熒光濾光片知識(shí)總結(jié)
物體發(fā)什么顏色的光是因?yàn)樗樟似渌伾墓舛瓷湓擃伾墓?,如FITC能吸收可見光譜中的藍(lán)色光,而發(fā)射黃綠色熒光。熒光的強(qiáng)度遠(yuǎn)弱于激發(fā)光,波長(zhǎng)要長(zhǎng)于激發(fā)光。
激發(fā)濾光片的作用是除去波長(zhǎng)與熒光光譜段相同的那部分激發(fā)光,即激發(fā)光中長(zhǎng)波段。
發(fā)射濾光片/接收濾光片:從熒光中除去短波部分激發(fā)光(仍是針對(duì)激發(fā)光)。
所以,熒光設(shè)備應(yīng)是如此工作,激發(fā)光源發(fā)射出激發(fā)光,到達(dá)激發(fā)濾光片后被除去與發(fā)射熒光重合部分的長(zhǎng)波段,然后到達(dá)熒光團(tuán),發(fā)射長(zhǎng)波熒光,再到達(dá)發(fā)射濾光片,被除去低于此熒光波長(zhǎng)的短波激發(fā)光,得到波段狹窄的熒光,從而不受強(qiáng)度遠(yuǎn)大于熒光本身的激發(fā)光干擾。
濾光片如標(biāo)有cut-in 515,則表示515以上的波段能通過,依此類推。而透析袋是cut-off 5KDa,表示5000以上分子量不能通過。
但濾光片并不能精確截止某個(gè)波段的光,而只是一個(gè)正態(tài)分布高斯峰的最高點(diǎn)。
截止型濾光片:通過長(zhǎng)于某個(gè)特定波長(zhǎng)的濾光片,如只能通過大于700nm的激發(fā)光。
帶通型濾光片:通過某個(gè)特定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的濾光片,如700-800nm。